试剂量

氟铬结合抗Brdu抗体一个65-μl小瓶

BD细胞固定液/细胞膜缓冲液一瓶25毫升

BD Perm/Wash Buffer（10x）两瓶25毫升

BD细胞渗透缓冲液加一瓶10毫升

7-AAD 1毫升小瓶

Brdu（10 mg/ml）5个0.5 ml小瓶

D酶5个300-μl小瓶

说明

结合溴脱氧尿苷（Brdu）的免疫荧光染色和流式细胞术分析提供了一种高分辨率技术来确定合成DNA的单个细胞的频率和性质。在该方法中，Brdu（DNA前体胸苷的一种类似物）通过进入并通过细胞周期的S（DNA合成）阶段进入新合成的DNA中，并用特定的抗Brdu荧光抗体对所合成的Brdu进行染色。然后用流式细胞仪测量细胞相关Brdu的水平。通常，用与总DNA结合的染料染色，如7-氨基放线菌素D（7-AAD）与免疫荧光BrdU染色结合。通过这种结合，双色流式细胞术分析允许根据细胞周期位置（即，g0/1、s或g2/m阶段，由7-AAD染色强度定义）对主动合成DNA（Brdu掺入）的细胞进行计数和表征。

准备和储存

抗体、缓冲剂和7-AAD。

在2-8°C下保存荧光铬结合抗BrdU抗体、Bd细胞固定/细胞固定缓冲液、Bd细胞固定/细胞固定缓冲液、BD细胞固定/洗涤缓冲液、BD细胞渗透缓冲液Plus和7-AAD。保持荧光铬结合抗BrdU抗体和7-AAD免受光照。

1X BD细胞固定/细胞排列缓冲液的未使用部分可在2至8°C下储存。

Brdu和Dnase。

将Brdu和Dnase储存在-80°C

Brdu溶液在2至8°C下稳定达4个月，或者可以重新冷冻。避免多次冻融循环。

dnase储备溶液（1mg/ml）在失去活性前可重新冷冻一次。