怎样提高细胞冻存的成功率
在做细胞冻存这种济南实验试剂的时候,有很多的小学弟学妹跟着学长学姐做。学弟学妹按照应有步骤一步步的践行,可是最后还是死了很多很多。这看起来好像是一个笑话,但是实际上这更像是一个很痛苦的事情。因为对于科研人员来说,细胞是最脆弱又十分重要的宝贝,因为它承担着太多太多实验者的希望。细胞冻存复苏的时候,经常会因为一些小细节导致细胞的死亡,例如:
风水
出各种玄学状况的时候,污染物是毋庸置疑的源头,培养室的空气、培养箱内循环的空气、培养箱的层架以及显微镜的载物台和物镜都可能是污染源。还
有就是你自己,进入无菌间后尽量不要说话,进入无菌间后尽量不要说话,进入无菌间后尽量不要说话。打开培养箱后jue对不能说话,打开培养箱后jue对不能说话,打开培养箱后jue对不能说话。
不要对着它念叨,要用你的心去感化细胞,重要的事情说三遍。
温度
慢冻快融是细胞冻存复苏的核心关键词之一。常见的是 -4℃ → -20℃ 至 - 40℃→ -80℃ → 液氮,有着严格的梯度降温。
目前更多使用程序降温盒,将细胞冻存管放于盒内,之后再置于超低温冰箱,程序降温盒可控制每分钟下降1℃,一定要避免温度原因导致细胞自取灭亡;除非使用了成分经过优化、经过严格测试的冻存液,才能免去程序降温这个繁琐的步骤。保存的时候也要保证整个细胞都是处于液氮的液面下方,避免温度对细胞存活的影响。
水土
解冻后的细胞要用和以前一样的培养液和无血清细胞冻存液种类。因为每一种细胞都有自己特定的,并且已经熟悉了的生长环境。突然使用不一样的培养液和血清,会造成细胞生长不良,甚至死亡。这和一个人突然离家千里,会水土不服是一样的道理。
除了操作中的各种小细节,还有一个实验雷区,就是配制无血清细胞冻存液质量。常见的冻存液配制要遵循培养基 + 血清 + DMSO 的成分要求,根据细胞实际判断成分配比,还建议使用程控仪,注意配制温度,一个不小心就又会影响细胞的存活效果。